抑菌效力试验

时间:2022-10-10 11:18点击:

抑菌效力试验是针对抑制微生物生长的化学物质进行试验。用于测定无菌及非无菌制剂的抑菌活性,用于指导生产企业在研发阶段制剂中抑菌剂种类和浓度的确定。

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1、菌种

制剂中常见的污染微生物也可作为试验菌株,例如含高浓度糖的口服制剂还应选用鲁氏酵母为试验菌株。

2、菌液制备

(1)铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌若为琼脂培养物,加入适量的0.9%无菌氯化钠溶液将琼脂表面的培养物洗脱,并将菌悬液移***无菌试管内,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释并制成每1ml含菌数约为l0^8cfu的菌悬液;若为液体培养物,离心收集菌体,用0.9%无菌氯化钠溶液稀释并制成每1ml含菌数约为l08cfu的菌悬液。取黑曲霉的新鲜培养物加入适量含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱,然后,用适宜方法吸出孢子悬液***无菌试管内,加入适量的含0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数l08cfu的孢子悬液。测定1ml菌悬液中所含的菌数。

(2)菌液制备后若在室温下放置,应在2小时内使用;若保存在2~8℃,可在24小时内使用。

(3)黑曲霉的孢子悬液可保存在2~8℃,在7天内使用。

3、供试品接种

(1)抑菌效力可能受试验用容器特征的影响,如容器的材质、形状、体积及封口的方式等。因此,只要供试品每个包装容器的装量足够试验用,同时容器便于按无菌操作技术接入试验菌液、混合及取样等,一般应将试验菌直接接种于供试品原包装容器中进行试验。

(2)若因供试品的性状或每个容器装量等因素需将供试品转移***无菌容器时,该容器的材质不得影响供试品的特性(如吸附作用),特别应注意不得影响供试品的pH值,pH值对抑菌剂的活性影响很大。

(3)取包装完整的供试品***少4份,直接接种试验菌,或取适量供试品分别转移***4个适宜的无菌容器中,若试验菌株数超过4株,应增加相应的供试品份数,每一容器接种一种试验菌,1g或1ml供试品中接菌量为105~106cfu,接种菌液的体积不得超过供试品体积的1%,充分混合,使供试品中的试验菌均匀分布,然后置20~25℃避光贮存。

4、存活菌数测定

(1)存活菌数测定方法及方法适用性试验照“非无菌产品微生物限度检查:微生物计数法(通则1105)”进行,菌液制备同培养基适用性检查,方法适用性试验试验菌的回收率不得低于50%。

(2)根据存活菌数测定结果,计算1ml (g)供试品各试验菌所加的菌数及各间隔时间的菌数,并换算成lg值。

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